产品与合作

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LZCap AG

发布:2022-04-24 阅读:273

产品描述:LZCapTM AG是一种Cap1类似物,可以作为mRNA共转录加帽试剂,在T7聚合酶作用下,利用LZCapTM AG、NTPs以及模板DNA共转录产生带5’端Cap 1结构的mRNA,加帽后的mRNA能直接在细胞和体内翻译表达。广泛应用于体外转录、基因编辑、疫苗研发、肿瘤CAR-T治疗、蛋白代替疗法以及再生医学等领域。

LZCapTM AG需要T7启动子以AG作为起始序列,LZCapTM AG的加帽率达到95%以上,1μg起始模板量转录产生90-200μg mRNA。

分子量:    1173.73

分子式:    C34H47N15O24P4

CAS:/

浓  度:     100mM

规  格:     10μl、100μl、500μl、1ml,(大包装可定制)

纯  度:     HPLC ≥95%

可制盐型:NH4+、 Na+ 

运输与保存:冰袋运输,-20°C保存,避免反复冻融。 

质量分析

HPLC准确检测产品的纯度,确保LZCapTM AG产品纯度达到95%以上。

AX-HPLC

质量分析.png

LZCapTM AG的分子量经过液相色谱质谱联用仪(LC-MS)确认

LC-MS


LC-MS.png

LZCapTM AG的结构经核磁共振31P谱、1H谱确认

31P NMR 谱图


31P NMR 谱图.png

1H NMR 谱图


1H NMR 谱图.png

DNase和RNase检测

检测原理基于高度敏感的酶特异性底物,该底物与有活性DNase和RNase发生反应,释放绿色荧光,检测极限是0.4 pg DNase或RNase/ml溶液。荧光检测产品分别产生荧光FAM及VIC,可以检测缓冲液中试剂盒缓冲液,塑料耗材、培养耗材、设备上的DNase或RNase是否污染。

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蓝色线条表示LZCapTM AG样品在不同循环数下DNase酶和RNase扩增的结果都为0,提示没有DNase和RNase污染。

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阳性对照的样品随着循环数的增加,荧光值也逐渐增加,提示有DNase和RNase的存在;阴性对照没有扩增,荧光值为0,提示没有DNase和RNase。

DNA模板设计

LZCapTM AG适用于AG起始的序列,如下图所示,T7启动子(下划线)后接AG序列能够有效起始转录。

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实验流程

1、在冰上解冻实验所需的组分。 

2、参考以下反应体系室温配置转录体系。

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为了进一步降低mRNA的免疫原性,恒诺康还可以为您提供修饰核苷酸N1-Me-pUTP(假尿嘧啶)(货号:HN100210)用来代替UTP参与转录反应。

备注:

LZCapTM AG适用于以5’AG 3’起始序列的T7启动子转录载体,在载体构建时需要加以考虑。

② 实验所用的试剂耗材和容器等无RNase污染。

③ 建议使用线性化的DNA模板进行转录。

④ 使用修饰核苷酸代替野生型核苷酸时,反应终浓度不变。

⑤ 若使用PCR产物作为转录起始模板,DNA模板量可以减少一半。

3、将配置好的反应液混匀,短暂离心后,置于37℃孵育2-3小时。若转录本长度小于 100nt,增加反应时间至 4-8 h。

转录产量

LZCapTM AG 加帽率可以达到95%以上,1μg线性化DNA模板转录产量为90~200μg。

以luciferase基因作为DNA模板,进行体外共转录后,通过琼脂糖电泳以及NanoDrop 分光光度计检测转录产物的完整性和浓度。

1-2:ARCA转录产物;3-4:国内市售CleanCap AG(3’OMe)同结构帽类似物转录产物;5-6:LZCapTM AG转录产物;7-8:未添加帽类似物的常规转录产物;9-10:阴性对照(无DNA模板)。  


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细胞表达

转录所得包含luciferase基因的mRNA转染Huh-7和293T细胞,检测荧光值,判断加帽与不加帽mRNA的翻译表达情况。检测结果显示LZCapTM AG加帽的mRNA细胞表达国内市售CleanCap AG(3’OMe)同结构的三倍左右。

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