产品描述：LZCap^TM AG是一种Cap1类似物，可以作为mRNA共转录加帽试剂，在T7聚合酶作用下，利用LZCap^TM AG、NTPs以及模板DNA共转录产生带5’端Cap 1结构的mRNA，加帽后的mRNA能直接在细胞和体内翻译表达。广泛应用于体外转录、基因编辑、疫苗研发、肿瘤CAR-T治疗、蛋白代替疗法以及再生医学等领域。

LZCap^TM AG需要T7启动子以AG作为起始序列，LZCap^TM AG的加帽率达到95%以上，1μg起始模板量转录产生90-200μg mRNA。

分子量：    1173.73

分子式：    C₃₄H₄₇N₁₅O₂₄P₄

CAS：/

浓  度：     100mM

规  格：     10μl、100μl、500μl、1ml，（大包装可定制）

纯  度：     HPLC ≥95%

可制盐型：NH4+、 Na+ 

运输与保存：冰袋运输，-20°C保存，避免反复冻融。 

质量分析：

HPLC准确检测产品的纯度，确保LZCap^TM AG产品纯度达到95%以上。

AX-HPLC

LZCap^TM AG的分子量经过液相色谱质谱联用仪(LC-MS)确认

LC-MS

LZCap^TM AG的结构经核磁共振³¹P谱、¹H谱确认

³¹P NMR 谱图

¹H NMR 谱图

DNase和RNase检测

检测原理基于高度敏感的酶特异性底物，该底物与有活性DNase和RNase发生反应，释放绿色荧光，检测极限是0.4 pg DNase或RNase/ml溶液。荧光检测产品分别产生荧光FAM及VIC，可以检测缓冲液中试剂盒缓冲液，塑料耗材、培养耗材、设备上的DNase或RNase是否污染。

蓝色线条表示LZCap^TM AG样品在不同循环数下DNase酶和RNase扩增的结果都为0，提示没有DNase和RNase污染。

阳性对照的样品随着循环数的增加，荧光值也逐渐增加，提示有DNase和RNase的存在；阴性对照没有扩增，荧光值为0，提示没有DNase和RNase。

DNA模板设计

LZCap^TM AG适用于AG起始的序列，如下图所示，T7启动子（下划线）后接AG序列能够有效起始转录。

实验流程

1、在冰上解冻实验所需的组分。 

2、参考以下反应体系室温配置转录体系。

为了进一步降低mRNA的免疫原性，恒诺康还可以为您提供修饰核苷酸N1-Me-pUTP（假尿嘧啶）（货号：HN100210）用来代替UTP参与转录反应。

备注：

① LZCap^TM AG适用于以5’AG 3’起始序列的T7启动子转录载体，在载体构建时需要加以考虑。

② 实验所用的试剂耗材和容器等无RNase污染。

③ 建议使用线性化的DNA模板进行转录。

④ 使用修饰核苷酸代替野生型核苷酸时，反应终浓度不变。

⑤ 若使用PCR产物作为转录起始模板，DNA模板量可以减少一半。

3、将配置好的反应液混匀，短暂离心后，置于37℃孵育2-3小时。若转录本长度小于 100nt，增加反应时间至 4-8 h。

转录产量

LZCap^TM AG 加帽率可以达到95%以上，1μg线性化DNA模板转录产量为90~200μg。

以luciferase基因作为DNA模板，进行体外共转录后，通过琼脂糖电泳以及NanoDrop 分光光度计检测转录产物的完整性和浓度。

1-2：ARCA转录产物；3-4：国内市售CleanCap AG（3’OMe）同结构帽类似物转录产物；5-6：LZCap^TM AG转录产物；7-8：未添加帽类似物的常规转录产物；9-10：阴性对照（无DNA模板）。  

细胞表达

转录所得包含luciferase基因的mRNA转染Huh-7和293T细胞，检测荧光值，判断加帽与不加帽mRNA的翻译表达情况。检测结果显示LZCap^TM AG加帽的mRNA细胞表达是国内市售CleanCap AG（3’OMe）同结构的三倍左右。